O filme se passa 200 anos antes dos eventos do primeiro filme e segue a história de Selene (Beckinsale), uma vampira guerreira que busca vingança contra os lycans (lobisomens) pelo assassinato de seu mentor, Viktor (Nighy). Selene se junta a Michael Corvin (Speedman), um meio-lobisomem, para descobrir a verdade sobre a origem da guerra entre vampiros e lycans.
* Selene: Uma vampira guerreira que busca vingança contra os lycans pelo assassinato de seu mentor.
* Michael Corvin: Um meio-lobisomem que está sendo caçado pelos lycans.
* Viktor: Um vampiro antigo que é o líder dos vampiros.
* Marcus: Um vampiro antigo que é o líder dos lycans.
* Lucian: Um lobisomem que está liderando uma rebelião contra os vampiros.
* Sonja: Uma vampira que é a mãe de Selene.
* A guerra entre vampiros e lycans.
* A natureza da violência.
* O poder do amor.
* A importância da família.